消毒与灭菌
发布时间:2011年03月07日     点击次数::
6 消毒与灭菌

灭菌指用化学或物理的方法杀灭或去除物料及设备中所有生命物质的技术或工艺过程。

1)化学物质灭菌

原理:药物与微生物细胞中的成分作用,使蛋白质变性、酶失活。

常用的灭菌剂:

化学物质名称

有效浓度

化学物质名称

有效浓度

新洁尔灭(苯扎溴铵)

0.25%

甲醛

37%

杜灭芬

0.25%

过氧乙酸

0.020.2%

高锰酸钾

0.10.25%

焦碳酸二乙酯

0.010.1%

漂白粉

5%

煤酚皂(来苏尔)

15%

酒精

75%

 

 

使用范围:器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌等,但不能用于培养基灭菌。

2)辐射灭菌

原理:利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。

常用:紫外线、X射线和γ射线。

使用范围:用于室内空气及器皿表面灭菌。

3)干热灭菌

原理:利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩的作用而杀灭微生物。

常用方法:灼烧和电热箱加热,140180℃,12小时。

使用范围:玻璃、金属用具及沙土管灭菌;吸管、玻璃细胞培养瓶等常以此法灭菌。

4)湿热灭菌

原理:高压蒸汽灭菌设备中的纯的水蒸汽的温度可达100℃以上,从而导致带灭菌物体内外的微生物细胞中的蛋白质、核酸等的不可逆变性,以杀灭微生物。湿热灭菌就是以专用高压蒸汽灭菌设备产生高温水蒸汽(100℃以上),利用高温水蒸汽的潜热和穿透能力,来杀灭待灭菌物体内外的微生物的一种比较彻底的物理的灭菌措施。

常用方法(高压蒸汽灭菌):一般固体物121℃,30min;液体培养基可按需要设定灭菌温度和时间。

使用范围:多数细菌培养基、三角瓶、枪头、橡皮塞等;一般工业发酵设备的空消或者连消等也多用此法。

5)过滤除菌

原理:利用微生物不能透过特定大小的微孔滤膜的性质除菌,但对支原体等直径特别小的微生效果不佳。

方法:0.010.45 mm孔径滤膜或过滤器

使用范围:用于压缩空气除菌;酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌,如细胞培养基等。 

6.1.灭菌锅工作原理与使用

灭菌锅属于湿热灭菌设备,其工作介质是水(请使用单蒸水,尤其是比较高级的灭菌设备)。实验室常见的灭菌锅一般属于小型灭菌锅,其操作比较简单:

1)使用前检查锅内水位,确保使锅体内水位正常,以防烧毁。

2)正确包装和分装待灭物品(瓶、管等物品不能完全密封,应留有蒸汽逸出空隙;瓶内装液一般为2/3容积以下)将待灭菌物品的放入内桶,物品间应留有一些空隙,不宜太过拥挤,并将内桶正确地置于锅体中,以确保灭菌效果。

3)检查灭菌设备电源连接;检查放汽阀门、安全阀门是否关闭,密封胶圈等是否正常。

4)关盖并旋紧盖子上的法兰。【注意】若是多个螺母的设计,请用双手同时旋紧对称的两个,而不能按照单一的方向一一旋紧螺母。

5)灭菌温度和时间的设定。非数字式的灭菌锅设置很简单,一般直接调节相应的时间和温度旋钮即可,设置完毕后打开电源开关即可,灭菌过程中达到一定温度(100℃左右)需要放汽一次,以排除锅内空气,有的灭菌锅需要手动放汽或者监控灭菌温度。请注意数字式的灭菌锅稍微复杂,一般应先开电源,然后观察显示屏;屏幕上会显示当前所处的状态(如:锅的当前温度,当前所设置的灭菌温度、时间等)。按动“menμ”或者“set”按钮,进入灭菌温度或时间的设置,按动方向键可进行下一个设置项目(品牌不同,显示和设置均不一样)。设置完毕后需要按动“enter”“work”或者“start”才能开始工作,此时一般能听见锅内电磁铁吸合时发出的一声响。数字式的灭菌锅一般不需要手动放汽。

6)灭菌过程中应注意观察是否有漏气发生,若有漏气,应关闭电源,待自然冷却到90℃以下后方可重新开盖。【注意】①尽量不要直接通过放气阀放汽降温降压,尤其是锅内有液体物品时,急速降压容易造成液体迅速沸腾冲开瓶塞或者胀破容器。②戴棉手套操作,避免烫伤。

7)灭菌完毕,关闭电源。待锅冷却后,取出物品,及时旋紧瓶塞、拔除棉线或者烘干枪头盒等。

6.2.超净工作台的使用

超净工作台工作原理

1)超净工作台内配备紫外杀菌灯管,用于杀灭微生物。

2)超净工作台内变速离心机可将经过高效过滤器过滤的空气以水平或者垂直的单向气流吹出,并能以一定的均匀断面风速吹过工作区,带走尘埃颗粒和微生物颗粒,形成无尘、无菌的工作环境

超净工作台操作方法

1)接通电源。将电源插入插座,并打开整个超净工作台的总开关后,可以看到按钮面板个电源指示灯亮,表示电源处于接通状态。(通常,实验室的超净工作台总电源开关一直是处于打开状态)。

2)清理台面,拉下防尘玻璃挡板,紫外杀菌。若超净工作台内堆放有与本实验无关的物品,可先移出,用酒精棉球清洁台面后可预先放入实验相关的且能以紫外照射的材料进行紫外灭菌。拉下工作台前面的玻璃挡板,并关严。找到按键板,按下标有杀菌字样的按钮即可开启紫外灯管(再次按下该按钮则会闭紫外灯)进行杀菌,一般照射30min即可。

【注意】可将操作台面大致分为废物回收区、物品放置区和操作区。操作区内尽量不要堆放物品;不要在杀菌的同时开启风机。

3)开启风机和照明系统,开始实验。紫外杀菌结束前应先开启风机,再关闭紫外灯,最后掀起玻璃挡板开始实验。按钮板面上面标记开启/停止字样的按钮是风机的开启和关闭的按钮。正常情况下,风机的最低档在出厂时候已经满足风速要求。使用时可多次按下风量调节按钮选择需要的风速大小。按动风量调节按钮后,风速的变化为:的不断循环,并且有相应的灯指示风量状态。标有照明字样的按钮是超净工作台内照明灯的开关,可根据需要开启。

【注意】①试验操作时候尽量避免快速且大幅度移动,以减少对超净工作台内气流的扰乱,避免外界细菌进入。②有的超净台同时具有正压和负压系统,一般情况下使用正压系统;当试验的试剂可能有气体逸出,对人员造成刺激性伤害时候,可使用负压风道系统,使所有的气体只在超净台内部循环。

4)结束试验,清理台面,关闭风机,拉下防尘玻璃挡板。试验后,清理台面废弃物后,用酒精棉球擦拭台面。关闭风机后拉下防尘玻璃挡板。若下面还有试验,可打开紫外灯,为接下来再次使用做好准备。

超净工作台的维护

1)根据环境洁净度,定期更换滤布;定期对超净台内外进行清洁。

2)照明灯和紫外灯达到使用寿命后更换相同规格灯管。

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